miR-9通过靶向TLN1抑制卵巢浆液性癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

【摘要】卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一,其病死率居妇科癌症之首。尽管目前手术和化疗的方案已日臻成熟,但30年来,卵巢癌患者的5年生存率仅从37%提高到46%。对卵巢癌的发病机制缺乏全面、深入的了解,已成为改善卵巢癌预后的最大障碍之一。卵巢癌组织学类型复杂,浆液性癌是卵巢癌最常见的组织学亚型。nicroRNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA,通过与靶基因mRNA的3’非翻译区结合(3’untranslatedregion,3’UTR),在转录后水平调控基因的表达。近年发现,多种miRNA分子通过沉默癌基因或者抑癌基因的表达,参与癌细胞重要细胞生物程序的调控。证据表明,miRNA在卵巢癌中异常表达,与卵巢癌的发生、发展和预后等密切相关。TLN1基因编码的蛋白talinl(踝蛋白1),是一种黏着斑相关蛋白,它与多种细胞骨架蛋白结合,在细胞的粘附、运动中起重要作用。最近研究显示,TLN1在前列腺癌、肝癌、口腔鳞状细胞癌中过表达,且其表达与肿瘤的进展、转移密切相关。本课题组前期研究发现,在诱发性大鼠卵巢浆液性癌的起始和进展期,血清中均检测到升高的TLN1表达,提示TLN1可能参与卵巢浆液性癌(ovarianserouscancer,OSC)的发生、发展。为了明确TLN1与人类OSC的关系,本文第一部分采用免疫组织化学法对OSC病人组织标本的TLN1表达情况进行了检测,并分析其与OSC癌变、转移和两级分级等临床病理特征之间的联系。结果显示,TLN1在OSC中过表达,且其在淋巴结转移灶中的表达水平高于原发灶、在高级别OSC中的表达水平高于低级别OSC。这提示,TLN1可能促进OSC的进展、转移,并有可能作为一种OSC恶性表型和较差预后的标记物。为了探索OSC中TLN1的高表达是否与某个miRNA表达失调有关,本文第二部分首先利用生物信息学方法预测OSC中调控TNL1表达的候选niRNA,最终选择由5个miRNA靶标预测软件预测到的、且在OSC中低表达的miR-9作为进一步研究的对象。接下来,通过定量RT-PCR、westernblot和荧光素酶报告基因实验,证实TLN1确实是OSC细胞中miR-9的靶基因。本文第三部分旨在探寻miR-9对OSC细胞的作用及其分子机制。以3种人类OSC细胞系SKOV3、CAOV3和OVCAR3为研究材料,首先通过定量RT-PCR证实3种OSC细胞中miR-9的表达较正常卵巢表面上皮细胞系HOSEpiC明显下调,故而采用体外转染niR-9mimic的功能获得性研究方法,通过MTT、平板克隆形成、流式细胞凋亡检测、transwell迁移和侵袭等实验,考察miR-9对OSC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学特性的影响。结果表明,miR-9抑制OSC细胞的增殖、迁移、侵袭；对其凋亡没有显著影响。为了明确miR-9对OSC的抑制作用是否与其靶向调控TLN1的表达有关,接下来通过siRNA干扰的方法下调TLN1的表达,观察OSC细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等的变化。结果发现,下调TLN1对OSC细胞产生了与上调miR-9类似的效应,这提示TLN1可能是miR-9对OSC细胞抑制作用的主要介导者。本文最后通过、vesternblot法检测了miR-9对TLN1参与调节的、在癌细胞增殖、侵袭中发挥重要作用的FAK/AKT信号通路活性的影响,结果显示miR-9抑制FAK/AKT通路的活化,这进一步验证了TLN1对miR-9作用的贡献,并且证实FAK/AKT信号通路是miR-9作用的媒介之一。综上所述,本研究发现OSC中低表达的miR-9的靶基因TLN1在OSC中高表达；miR-9通过靶向调控TLN1在OSC中发挥抑癌因子的作用。本研究的结果有助于理解卵巢癌的发病机制,同时也可能为卵巢癌的治疗提供新的靶点。
【作者】唐浩莎；
【导师】徐丛剑；
【作者基本信息】复旦大学，妇产科学（专业学位），2013，博士
【关键词】微小RNA；卵巢癌；miR-9；TLN1；增殖；凋亡；迁移；侵袭；

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